从“体外制造”到“体内生成”，CAR-T治疗惠及大众的希望

传统的CAR-T细胞治疗（ex vivo CAR-T）需要从患者体内采集T细胞，在体外进行基因改造和扩增后再回输。尽管该疗法在治疗血癌，以及复发/难治性红斑狼疮（SLE）等自身免疫疾病中展现出巨大潜力—即通过彻底清除致病B细胞，能够实现长期的无药缓解，但其推广面临重重困难：

1、高昂的成本与复杂的工艺：个性化制备周期长，且对GMP生产环境要求高导致成本居高不下，难以标准化和规模化以降低治疗成本。

2、患者负担：回输前通常需要进行淋巴细胞清除化疗（Lymphodepletion），给患者带来额外的身体痛苦和感染风险。

与之相比，体内（in vivo）CAR-T技术被视为下一代细胞治疗的“圣杯”。它利用病毒或非病毒载体将CAR基因直接递送至患者体内的T细胞，省去了体外制备环节，使CAR-T疗法变为一种立等可取的“注射药物”，将极大降低治疗门槛和成本。

基于AI进化出的人T细胞靶向变体—AAV6-M2

为了寻找能精准“送货”到人T细胞的载体，马丽佳团队通过AI辅助设计构建了庞大的AAV衣壳蛋白VP3突变文库，通过高通量筛选，成功进化出AAV6-M2这一超级变体。

为了揭示AAV6-M2为何能如此高效地识别T细胞，研究团队综合运用全基因组CRISPR筛选、冷冻电镜（cryo-EM）结构解析及分子对接技术，发现AAV6-M2能够特异性结合T细胞表面的CD62L（L-selectin）分子。因为CD62L主要表达在初始T细胞（Naïve T）和中央记忆T细胞（TCM）表面，这意味着AAV6-M2介导生成的CAR-T细胞具备更强的扩增潜力和更持久的体内续航能力。另外，与传统方法不同，AAV6-M2无需预先激活T细胞即可完成转导，这一特性对于保持体内T细胞的天然功能至关重要。

单针AAV体内生成CAR-T，逆转红斑狼疮（SLE）病程

为了验证AAV体内生成CAR-T的能力，李颜团队通过免疫系统人源化小鼠模型（Human Immune System Mice，HIS mice)，验证仅需单次静脉注射AAV6-M2-CD19CAR，在体内多器官中（尤其在骨髓和脾中）高效生成了CAR-T细胞，在AAV注射后第6周后仍维持最高77.5%的CAR-T水平。无论是血液循环中的B细胞，还是躲藏在骨髓、脾脏等组织中的深层B细胞，均被高效清除。

随后，在还原典型狼疮症状的人源化小鼠模型中，验证了单针AAV6-M2的in vivo CAR-T治疗效果。治疗组小鼠的抗双链DNA（anti-dsDNA）和抗Sm抗体等自身抗体水平显著下降；狼疮肾炎症状得到明显改善，肾小球IgG沉积减少，尿素氮（BUN）和肌酐（CREA）水平恢复正常；肺部和肝脏的炎症浸润也完全消失。

这一结果有力证明，AAV6-M2介导的体内CAR-T疗法具备“单次给药、全身起效、深度缓解”的临床转化潜力。

显著的“脱肝”效应，降低传统AAV基因治疗安全性顾虑

安全性是AAV基因治疗面临的最大挑战之一，尤其是野生型AAV容易在肝脏大量富集，引发肝毒性。 本研究发现，得益于衣壳表面的电荷改变，AAV6-M2展现出卓越的肝脏脱靶（Liver De-targeting）特性：在小鼠和非人灵长类（食蟹猴）模型中，AAV6-M2在肝脏中的病毒基因组残留较野生型AAV降低了两个数量级（>100倍）以上。这不仅大幅降低了潜在的肝脏毒性风险，也意味着更多的病毒载体能被有效利用于靶向T细胞，提高了治疗的效费比。